[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي درباره نشريه آخرين شماره تمام شماره‌ها جستجو ثبت نام ارسال مقاله تماس با ما ::
:: دوره 14، شماره 3 - ( مرداد-شهريور 1391 ) ::
دوره 14 شماره 3 صفحات 1-11 برگشت به فهرست نسخه ها
بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا
ابوالفضل قلی پور، سید مجتبی موسویان، حمید گله داری، منوچهر مکوندی، سید علی مرد، حمید رجبی معماری، رضا ایمانی، ندا سلیمانی، امیر هوشنگ الوندی*
8گروه میکروب شناسی، دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه، کرمانشاه، ایران. ، E-mail:ah_alvandi@kums.ac.ir
چکیده:   (12852 مشاهده)

  زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( PAL ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب PAL باکتری لژیونلا پنوموفیلا بوده است.

  روش بررسی: در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی بیان پروتئین PAL با تغییر در پارامترهای دانسیته سلولی، مدت زمان القاء، دمای رشد، غلظت ایزوپروپیل بتا دی تیوگالاکتوپیرانوزید ( IPTG ) و نوع محیط کشت مورد بررسی قرار گرفت. پس از کلونینگ، عصاره پری پلاسمی تهیه و پروتئین نوترکیب PAL با استفاده از ستون رزین نیکل نیتروتری استیک اسید ( NTA ) تخلیص گردید. در نهایت پروتئین نوترکیب PAL با آزمایش وسترن بلاتینگ بررسی شد.

  یافته ها: با استفاده از محیط کشت Terrific Broth ، شروع القاء در جذب نوری 6/0 (طول موج 600 نانومتر)، غلظت یک میلی مولار ماده القاء کننده IPTG ، دمای رشد 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان 15 ساعت پس از القاء، بهترین بیان پروتئین PAL بدست آمد. پروتئین پری پلاسمی نوترکیب PAL با استفاده از ستون رزین NTA با خلوص بیش از 80% تخلیص گردید. نتایج آزمایش وسترن بلاتینگ نیز نشان داد که پروتئین نوترکیب PAL تخلیص شده به طور اختصاصی با آنتی بادی anti-His6-peroxidase شناسایی گردید.

نتیجه گیری: با تخلیص پروتئین PAL به میزان بیش از 80% می توان به منظور بررسی پتانسیل آن در تشخیص بیماری لژیونر و تهیه کیت تشخیصی بر اساس الایزا از آن استفاده نمود.
واژه‌های کلیدی: بهینه سازی، بیان، تخلیص، لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان، لژیونلا پنوموفیلا.
متن کامل [PDF 345 kb]   (2038 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: ۱۳۹۱/۴/۱۴
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA code


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Gholipour A, Moosavian S, Galehdari H, Makvandi M, Mard S, RajabiMemari H, et al . Optimization of gene expression and purification of Legionella pneumophila peptidoglycan associated lipoprotein recombinant protein. J Shahrekord Univ Med Sci. 2012; 14 (3) :1-11
URL: http://78.39.35.44/article-1-1163-fa.html

قلی پور ابوالفضل، موسویان سید مجتبی، گله داری حمید، مکوندی منوچهر، مرد سید علی، رجبی معماری حمید، و همکاران.. بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا. مجله دانشگاه علوم پزشکی شهركرد. 1391; 14 (3) :1-11

URL: http://78.39.35.44/article-1-1163-fa.html



دوره 14، شماره 3 - ( مرداد-شهريور 1391 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد Journal of Shahrekord University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.09 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3792